Eine UV-Gehaltsbestimmung zählt alles, was bei einer Wellenlänge absorbiert. HPLC trennt die Verbindungen zuerst und zählt diejenigen, die sie benennt. Die beiden Zahlen beantworten unterschiedliche Fragen.
Für einen Extrakt, der derselbe zu sein scheint, liegen zwei Angebote vor. Das eine gibt den Gehalt an aktiven Verbindungen nach UV an, das andere nach HPLC, und die Zahl nach UV ist deutlich höher. Keine der beiden Angaben muss falsch sein, und das Material kann sogar dasselbe sein. Die beiden Methoden zählen Verschiedenes, und jede gibt ihr Ergebnis in Bezug auf einen benannten Stoff an.
Hier sind sechs Prüfungen, die Sie vornehmen sollten, bevor Sie zwei Gehaltsangaben vergleichen oder ein Zertifikat mit dem Ergebnis Ihres eigenen Labors. Sie stützen sich auf die europäischen Leitlinien für pflanzliche Arzneimittel, die internationale Leitlinie zur Validierung analytischer Verfahren und veröffentlichte Studien; das Beispiel stammt aus unseren eigenen Spezifikationen. Unsere früheren Artikel behandelten die Spezifikation, das Extraktverhältnis, das Analysenzertifikat, das Extraktionsmittel und den Trägerstoff sowie die Kontaminantenzeilen; dieser beschränkt sich auf die Analysenmethode.
01 / DIE METHODE
Nennt die Gehaltszeile die Methode?
Eine Gehaltsangabe gehört zu der Methode, mit der sie ermittelt wurde. Die europäischen Leitlinien für pflanzliche Arzneimittel verankern das in ihrer Definition einer Spezifikation, „eine Liste von Prüfungen, Verweise auf analytische und biologische Verfahren und geeignete Annahmekriterien“, und Konformität bedeutet, dass das Material, „wenn es nach den aufgeführten analytischen Verfahren geprüft wird, die aufgeführten Annahmekriterien erfüllen wird“.1
In einer Spezifikation steht die Methode oft als kurzes Wort hinter der Zahl: UV, HPLC oder ein anderes Verfahren. Eine Zeile ohne sie ist unvollständig. Eine Übersichtsarbeit aus dem Jahr 2023 von Autoren des American Botanical Council und von Partnerorganisationen hält fest: Ergebnisse spektrophotometrischer Gehaltsbestimmungen „sind manchmal die einzigen Daten zur chemischen Zusammensetzung eines pflanzlichen Rohstoffs, die auf einem Analysenzertifikat angegeben werden“, und sie fügt hinzu, dass die Angabe der Methodik hinter einem quantitativen Ergebnis „zur gängigen Branchenpraxis werden sollte“.2
Prüfen: ob die Gehaltszeile die Methode nennt und ob Spezifikation, Angebot und Zertifikat alle dieselbe nennen.
02 / UV
Was zählt eine Zahl nach UV?
In einer Spezifikation steht UV für die UV-Vis-Spektrophotometrie. Der Extrakt wird gelöst, bei vielen Gehaltsbestimmungen wandelt ein Reagenz die gesuchten Verbindungen in ein farbiges Produkt um, und gemessen wird das Licht, das die Lösung bei einer Wellenlänge absorbiert. Die Verbindungen in der Lösung werden nicht voneinander getrennt, sodass alles, was bei dieser Wellenlänge absorbiert, in das Ergebnis eingeht.2
Die Übersichtsarbeit nennt die Folge: Konzentrationen, die spektrophotometrisch ermittelt werden, „sind häufig höher als die Ergebnisse anderer quantitativer Methoden, aufgrund von Störungen durch Nicht-Ziel-Analyten, die bei der interessierenden Wellenlänge absorbieren“. Ihr Beispiel ist Mariendistelextrakt, bei dem die Silymarin-Konzentrationen „in der Regel zwischen 30 % und 65 % mit HPLC-UV und bei 65–80 % mit spektrophotometrischen Tests liegen“.2
Die Leitlinie zur Validierung analytischer Verfahren hat einen Namen für diese Eigenschaft. Spezifität und Selektivität beschreiben „das Ausmaß, in dem andere Substanzen die Bestimmung eines Analyten stören“.3 Die europäischen Leitlinien für pflanzliche Arzneimittel nehmen eine UV-Vis-Gehaltsbestimmung als Beispiel für eine unspezifische Gehaltsbestimmung.1 Eine Zahl nach UV ist daher die Zahl für eine Gruppe von Verbindungen und sollte auch als solche gelesen werden.
Prüfen: bei einer Zahl nach UV, welche Gruppe von Verbindungen sie erfassen soll und welches Reagenz und welche Wellenlänge die Methode verwendet.
03 / HPLC
Was zählt eine Zahl nach HPLC?
HPLC, die Hochleistungsflüssigchromatographie, trennt den gelösten Extrakt in seine Verbindungen, bevor etwas gemessen wird. Die Verbindungen erscheinen dann als einzelne Peaks, und die Methode zählt die Peaks, die sie benennt. Der Detektor hinter der Säule ist meist ebenfalls eine Lichtmessung: Die Übersichtsarbeit nennt den UV/vis-Detektor das „am weitesten verbreitete Detektionssystem“.2 Der Hauptunterschied zwischen den beiden Methoden ist die Trennung.
Eine Zahl nach HPLC steht also für die Verbindungen, die die Methode benennt, eine oder mehrere zusammengezählt, und die Spezifikation sollte angeben, welche. Der Bericht der Europäischen Arzneimittel-Agentur über die Waldheidelbeere zeigt das Muster. Er zitiert die Definition des Europäischen Arzneibuchs für den raffinierten und standardisierten Trockenextrakt aus frischen Waldheidelbeeren: 32,4 % bis 39,6 % Anthocyane, „angegeben als Cyanidin-3-O-glucosidchlorid“. Laut der Aufstellung im Bericht zeigt das Chromatogramm dieser Gehaltsbestimmung zwanzig benannte Peaks: fünfzehn Anthocyane und fünf Anthocyanidine, ihre zuckerfreien Formen.4
Eine Verbindung, die die Methode nicht benennt, wird nicht mitgezählt, wie viel davon der Extrakt auch enthält. Und manche Gruppen lassen sich nur teilweise trennen: Bei Proanthocyanidinen ist, so die Übersichtsarbeit, die Trennung der größeren Moleküle „auf chromatographischem Wege schwierig; daher verwenden Lieferanten im Allgemeinen spektrophotometrische Methoden zur quantitativen Analyse“.2
Prüfen: bei einer Zahl nach HPLC, welche Verbindungen gezählt werden und ob die Zahl ihre Summe oder eine einzelne benannte Verbindung ist.
04 / DER STANDARD
Gegen welchen Standard, und angegeben als was?
Bei einer Gehaltsbestimmung liest keine der beiden Methoden einen Prozentwert direkt von der Probe ab. Das Signal wird anhand eines benannten Stoffs in eine Menge umgerechnet, der entweder als Standard mitgemessen oder in die Berechnung eingebaut wird; in den europäischen Leitlinien werden Referenzstandards „zur Identitäts- und Reinheitsprüfung und zur Gehaltsbestimmung“ verwendet.1 Das Ergebnis wird dann bezogen auf einen benannten Stoff oder eine benannte Gruppe angegeben. Die Leitlinie zur Deklaration pflanzlicher Drogen und pflanzlicher Zubereitungen zeigt die Formulierung: bei Sennesblättern Hydroxyanthracenglykoside „berechnet als Sennosid B“, bei einem Ginkgoblattextrakt Flavonoide „angegeben als Flavonglykoside“.5 Was benannt wird, ist nicht immer das, was gemessen wurde: Arzneibuchmethoden für Ginkgo bestimmen die Flavonoide üblicherweise nach einer Säurehydrolyse, die ihre Zucker abspaltet.2
Ändert man den Referenzstandard, ändert sich die Zahl, obwohl Methode und Material gleich bleiben. Bei Cranberry-Proanthocyanidinen, die mit einer Farbreaktion, der DMAC-Analyse, gemessen werden, berichtet eine Studie, dass ein aus Cranberry selbst hergestellter Standard „zu Werten führte, die 2,2-mal höher waren als die mit Procyanidin A2 bestimmten“.6
Auch die Form des Moleküls zählt. Der Bericht über die Waldheidelbeere beschreibt einen Extrakt mit zwei Zahlen, „36 % Anthocyanoside, entsprechend 25 % Anthocyanidinen“: Die zweite Zahl zählt dieselben Moleküle ohne ihren Zuckerteil.4
Unser Cranberry-Extrakt ist ein Beispiel für eine Gehaltsangabe, die ihre Methode und ihren Standard nennt. Er ist auf mindestens 30 % lösliche Gesamtproanthocyanidine (PACs) nach BL-DMAC / UV-Vis spezifiziert, berechnet als Procyanidin-A2-Äquivalente. Die Analyse verwendet Procyanidin A2 als Referenzstandard und misst die Absorption bei 640 nm; sie bestimmt nicht die Reinheit isolierter PACs vom A-Typ. Ergebnisse aus unterschiedlichen Analysemethoden oder Kalibrierstandards sind nicht automatisch vergleichbar.
Prüfen: den Referenzstandard und die Form, in der das Ergebnis angegeben ist: eine benannte Verbindung, eine Gruppe oder die Moleküle mit oder ohne ihren Zuckerteil.
05 / DIE WAHL
Welche Methode passt zu der Zahl, die Sie brauchen?
HPLC ist nicht in jedem Fall die bessere Methode. Die Validierungsleitlinie nennt, was die Validierung jeder Methode zeigen muss: „dass das analytische Verfahren für den vorgesehenen Zweck geeignet ist“.3 Ist der Marker eine Verbindung oder einige wenige, kann eine Trennmethode sie direkt zählen. Ist es eine ganze Gruppe, die sich chromatographisch nicht auftrennen lässt, ist die Gruppenbestimmung das übliche Werkzeug.2
Eine Laborvergleichsstudie zur DMAC-Analyse für Cranberry bezeichnete sie als „eine einfache, robuste und relativ spezifische spektrophotometrische Gehaltsbestimmung für Gesamt-PACs in Cranberry-Proben“ und fügte hinzu, sie sei „für den Vergleich von Konzentrationen in verschiedenen Lebensmittelarten möglicherweise nicht geeignet“.7
Eine Gruppenbestimmung kann nicht zeigen, woher die Verbindungen stammen: Von den Farbreaktionen, die für Proanthocyanidine verwendet werden, sagt die Übersichtsarbeit, dass keine von ihnen „PACs aus verschiedenen Quellen unterscheiden kann“.2 Die europäischen Leitlinien für pflanzliche Arzneimittel bevorzugen ein spezifisches Verfahren, wo immer eines möglich ist; wo eine unspezifische Gehaltsbestimmung begründet ist, verweisen sie auf eine zweite Prüfung: „eine Kombination aus der Gehaltsbestimmung und einer geeigneten Identitätsprüfung (z. B. Fingerprint-Chromatographie) kann verwendet werden“.1 Die Validierungsleitlinie sagt es allgemein: Ein Mangel an Spezifität „sollte durch ein oder mehrere andere unterstützende analytische Verfahren ausgeglichen werden, es sei denn, dies ist angemessen begründet“.3
Prüfen: ob die Methode zum Marker passt und, wo eine Gruppenbestimmung verwendet wird, welche Identitätsprüfung neben ihr steht.
06 / IHR LABOR
Verwendet Ihre eigene Prüfung dieselbe Methode?
Eine Zahl lässt sich nur mit der Methode bestätigen, mit der sie ermittelt wurde. Wenn Ihr Labor eine Lieferung mit HPLC gegen eine Spezifikation prüft, die nach UV formuliert ist, ist sein Ergebnis kein Ergebnis im Sinne dieser Spezifikation, ob es nun niedriger oder höher ausfällt. Es gibt keinen allgemeinen Faktor, um eine Zahl in die andere umzurechnen: Der Abstand hängt davon ab, was der Extrakt sonst noch enthält und wie jedes Ergebnis angegeben wird.
Selbst mit einer einzigen Methode liefern zwei Labore nicht dieselbe Zahl. In der Laborvergleichsstudie analysierten fünf Labore dieselben elf Cranberry-Proben mit derselben DMAC-Methode. Die Ergebnisse streuten im Mittel um 4,1 % innerhalb eines Labors und um 16,9 % zwischen den Laboren (Spanne 8 % bis 32 %), gemessen als relative Standardabweichung.7
Klären Sie daher vor der Bestellung drei Dinge: die Methode, mit Namen und mit Verweis auf ein Arzneibuch oder eine schriftliche Prüfvorschrift; den Referenzstandard; und den Unterschied zwischen zwei Laboren, den beide Seiten akzeptieren. Bei Arzneimitteln mit einer Arzneibuchmonographie sagen die europäischen Leitlinien, welche Methode entscheidet, wenn eine andere verwendet wurde: „Im Zweifels- oder Streitfall sind die Analysenmethoden des Arzneibuchs maßgebend.“1 Wo keine Arzneibuchmethode anwendbar ist, muss die vereinbarte Spezifikation diese Aufgabe übernehmen. Unser Artikel über das Analysenzertifikat behandelt die Prüfungen, die Sie vornehmen sollten, wenn das Zertifikat eintrifft.
Prüfen: ob Ihr Labor und das Labor hinter dem Zertifikat dieselbe Methode und denselben Referenzstandard verwenden und welchen Unterschied zwischen ihren Ergebnissen beide Seiten akzeptieren.
WAS SIE SENDEN
Nennen Sie die Methode in Ihrer Anfrage
Wenn eine Gehaltsangabe für Ihr Produkt wichtig ist, nennen Sie uns:
- den Rohstoff und, falls mehrere angeboten werden, den Pflanzenteil;
- Ihre vorgesehene Anwendung und Ihren Zielmarkt;
- die Verbindung oder Gruppe, die Sie benötigen, und den Zielgehalt;
- die Analysenmethode, die Ihr Qualitätsteam verwendet, und den Referenzstandard, sofern er Bestandteil der Analyse ist;
- ob Sie die Lieferung selbst prüfen werden und mit welcher Methode;
- die technischen Dokumente, die Sie benötigen, etwa eine Spezifikation oder ein Analysenzertifikat;
- Ihren Namen, Ihr Unternehmen und Ihre Kontaktdaten.
Ein prozentualer Gehalt an aktiven Verbindungen ist aussagekräftiger, wenn Analyseverfahren und Referenzstandard angegeben werden. Teilen Sie uns diese Anforderungen zusammen mit Ihrem Zielgehalt mit, damit Spezifikation und Angebot das für Ihr Projekt benötigte Material beschreiben. Die Spezifikationsbereiche in unserem Katalog dienen als Referenz; Machbarkeit, Verfügbarkeit und Preis werden mit Ihrem Angebot bestätigt.
Das Produktbeispiel stammt aus Spezifikationen und technischen Dokumenten von YOHOLIFE®. Dieser Artikel nennt keine weiteren Gehaltsangaben für unsere Rohstoffe; die Methode und die Spezifikation für eine ausgewählte Qualität werden bei Ihrer Anfrage bestätigt. Die Quellen 1, 3, 4 und 5 wurden für Arzneimittel verfasst und werden hier wegen ihrer Definitionen und Beispiele angeführt; Quelle 2 ist eine Übersichtsarbeit zu veröffentlichten Arbeiten; die Quellen 6 und 7 sind Studien zu einer Gehaltsbestimmung für Cranberry und wurden in ihren veröffentlichten Kurzfassungen gelesen. Die Quellen wurden am 12. November 2026 geprüft.
